章茶粕多糖的分级纯化及结构初探碳酸氢钠和 中煮沸 用蒸馏水清洗

作者:admin 来源:未知 点击数: 发布时间:2019年08月09日

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  章茶粕多糖的分级纯化及布局初探碳酸氢钠和 中煮沸 用蒸馏水清洗后再在 中煮沸 冷却后于 冰箱保留利用前用蒸馏水清洗清洁。将脱除卵白的多糖溶液浓缩至原体积的 插手倍体积的 乙醇沉淀多糖 置于 离心取沉淀用少量蒸馏水消融后装入截留量为 的透析袋中 先用自来水透析 再用蒸馏水透析 换一次水以除去低聚糖、无

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  章茶粕多糖的分级纯化及布局初探碳酸氢钠和 中煮沸 用蒸馏水清洗后再在 中煮沸 冷却后于 冰箱保留利用前用蒸馏水清洗清洁。将脱除卵白的多糖溶液浓缩至原体积的 插手倍体积的 乙醇沉淀多糖 置于 离心取沉淀用少量蒸馏水消融后装入截留量为 的透析袋中 先用自来水透析 再用蒸馏水透析 换一次水以除去低聚糖、无机盐等小分子物质 透析完后将透析液冷冻干燥得固体粉末 即为初步纯化的茶粕多糖 定名为 离子互换柱层析多糖是多分离性的夹杂物它在单糖构成、分子量分布、布局等方面具有不均一性 因而有需要对其进行分级纯化 以便进行布局解析和构效关系切磋。多糖的分级纯化凡是采用两种方式 一是按照阴离子电荷密度进行纯化 一是按照分子量大小进行纯化。本尝试起首对茶粕粗多糖进行 离子互换柱层析再进行 凝胶柱层析。 是一种弱阴离子互换剂中性多糖因为不带电荷根基不与 相连系 用水即可洗脱。而酸性多糖因为带负电荷与 发生离子互换被吸附 需要改变洗脱液的离子强度或者 值方可洗脱 。方式 将预处置好的 用蒸馏程度衡至柱进水和出水的值及电解质强度不异。取必然量颠末初步纯化后的茶粕多糖 主动部门收集器收集洗脱样品采用苯酚 硫酸法隔管检测多糖 以吸光度为纵坐标 管数为横坐标 绘制多糖洗脱曲线。归并洗脱峰各管洗脱液 扭转蒸发浓缩 透析后冷冻干燥。 凝胶过滤柱层析凝胶类层析介质【 】在其微粒内部具有分歧大小的网状布局 它像筛子一样能够按必然的挨次对大小分歧的生物大分子进行分手。因为分子量较大的分子不克不及进入或者不克不及完全进入凝胶内部的网状孔 只能沿凝胶颗粒间的空地或大的网状孔通过 因而迁徙路径小 保留时间较短 先从柱中流出 分子量小的笫 章茶粕多糖的分级纯化及布局初探分子能够进入凝胶内部的网状孔 沿着凝胶颗粒分歧大小的网状孔流过 因而分子迁徙的路径相对较长 保留时间长 后从柱中流出。方式 取必然量的颠末 分手纯化的分歧多糖组分采用 进行进一步分手纯化 采用蒸馏水洗脱 节制洗脱液流速为 主动部门收集器收集洗脱样品采用苯酚一硫酸法隔管检测多糖 以吸光度为纵坐标 管数为横坐标 绘制多糖洗脱曲线 并收集单一峰。 纯度判定 紫外扫描将茶粕粗多糖及分手获得的各组分多糖配制成浓度为 的溶液 用紫外分光光度计在 范畴内进行扫描。 凝胶过滤法称取经 柱分手获得的多糖样品 用少量蒸馏水消融后插手到 凝胶柱中 节制洗脱液流速为 主动部门收集器收集洗脱样品采用苯酚 硫酸法隔管检测多糖 以吸光度为纵坐标 管数为横坐标 绘制多糖洗脱曲线 察看接收峰外形 若峰型对称且单一 申明样品较纯 若峰形不合错误称 申明样品不纯 需要进一步分手纯化。 法将上述分手纯化获得的多糖组分流水透析 经浓缩、醇沉、离心、沉淀冷冻干燥后用双蒸水配制置成 的多糖溶液 进行 纯度检测。色谱柱为 流动相流速 一般理化性质判定消融性试验用水、乙醇、丙酮、正丁醇调查茶粕多糖消融性。 反映别离取浓度为 的分歧组分的多糖溶液 于试管中 插手 章茶粕多糖的分级纯化及布局初探仅萘酚乙醇溶液 试剂 将试管倾斜后沿试管壁慢慢插手 浓硫酸 察看浓硫酸与糖溶液交壤面颜色的变化 同时以蒸馏水为阳性对照 的淀粉指示剂为阳性对照。 苯酚 硫酸反映参照 的方式。 硫酸 咔唑反映【 】精确量取 浓度为 的多糖水溶液于具塞试管中 在冰水浴中插手 浓硫酸 摇匀后于 水浴 取出后冷却至室温 插手 咔唑液 室温下连结 小时后不‘ 处测定吸光值 考马斯亮蓝反映参照 的的方式。 反映取浓度为 的多糖水溶液于具塞试管中 插手 溶液察看颜色变化。 柱前衍生化 法测定单糖构成 夹杂单糖标样的衍生别离取各类单糖、糖醛酸及夹杂单糖尺度样品溶液 各单糖摩尔浓度均为 顺次插手 水浴中反映取出置冷水浴中 插手 中和再插手 的氯仿 弃去氯仿相如斯萃取 滤膜后供进样阐发。 样品制备精确称取各组分纯化好的茶粕多糖样品 水解管中插手 浓度为 的三氟乙酸 溶液 烘箱中水解将水解液减压干燥 插手甲醇清洗并用氮气吹干以除去 按此操作反复 向水解管中插手蒸馏水 充实振荡后按 的方式进行衍生化反映及色谱阐发。 色谱前提 流动相磷酸盐缓冲液 检测波长流速 进样体积 红外光谱阐发取样品与 干燥 傅立叶变换红外光谱仪在。内进行扫描 初步鉴定多糖的基连合构。 核磁共振阐发取 纯化后获得的多糖 消融用核磁共振仪检测 柱层析的洗脱蓝线如图所示。由图可知 茶粕多糖顺次颠末蒸馏水 溶液洗脱后均能获得一个峰顺次定名为 。收集各洗脱峰 将每一组分浓缩后 用流水透析 再用蒸馏水透析 后冷冻干燥。 章茶粕多糖的分级纯化及布局初探分歧组分多糖的纯度判定 紫外接收光谱阐发图 分歧组分茶粕多糖的紫外扫描光谱 如图所示 颠末脱卵白工艺处置后的茶粕多糖在 处有较着的征接收峰 申明此中含有卵白质、核酸等杂质 处有较着接收申明此中含有色素等杂质。这是由于酶 法虽然对卵白的断根率较高 但卵白与多糖常构成糖卵白复合物 使卵白的断根较为坚苦。颠末 柱层析分级纯化后 此中的组分 处有微弱接收可能含有少量卵白质 在此区间几乎没有特征接收峰而且三个组分在 处均没有特征接收。由此表白 对于茶粕多糖不只能起到优良的分级感化 而且也能无效的去除色素以及残存卵白。 茶粕多糖纯化组分的高效液相色谱图采用高效液相色谱法 判定茶粕多糖分歧组分的纯度 成果如图 章茶粕多糖的分级纯化及布局初探所示。经阐发 组分有两个峰 组分有三个峰 申明这两个组分的多糖不是均一多糖 需要对其进行进一步纯化。而 组分呈单一对称的峰 表白该组分是均一多糖 经测定纯度为 柱层析洗脱曲线如图 所示 组分颠末 柱层析获得两个洗脱峰 这与 的判定成果分歧。表白该组分含有两种分子量范畴的多糖 不是均一组分 需要进行进一步的分手纯化。 柱层析洗脱曲线如图 所示 组分颠末 柱层析得 个洗脱峰 这与 的判定成果分歧。因为在 柱层析中 这三个洗脱峰分手度 章茶粕多糖的分级纯化及布局初探不高不易收集 因而对此组分不进行进一步的纯化。 柱层析洗脱曲线如图 所示 组分颠末 柱层析获得一个均一对称的洗脱峰 这与 的判定成果分歧 表白该组分是均一多糖 能够进行进一步的布局阐发。 茶粕多糖一般理化性质判定表 分歧组分茶粕多糖的理化性质 消融性尝试表白 均为白色絮状物难溶于冷水 易溶于热水 不溶于乙醇、丙酮、 下丁醇等无机试剂。如表 所示 这三种组分的苯酚 硫酸反映及 反映均呈阳性 具有一般多糖的性质 碘一碘化钾反映呈阳性表白此中含有淀粉 可能是淀粉性多糖 硫酸一咔唑反映均呈阳性 表白不含有糖醛酸 考马斯亮蓝反映呈阳性表白此中含有卵白 这与紫外判定的成果分歧 碘化钾反映及考马斯亮蓝反映均呈阳性申明不含有淀粉以及卵白质 硫酸 咔唑反映呈阳性 申明此中含有糖醛酸。 章茶粕多糖的分级纯化及布局初探柱前衍生化 法测定各组分多糖的单糖构成上 尺度对照单糖及分歧组分茶粕多糖的图谱 顺次为甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖 逐个 章茶粕多糖的分级纯化及布局初探各组分茶粕多糖的单糖构成判定成果如图所示 由图可知 次要含有 此外还含有少量其摩尔比为 的单糖构成为 以及少量的其摩尔比为 次要含有 和少量摩尔比为 红外光谱阐发的红外光谱见图 这是因为糖分子内或分子问氢键的伸缩振动惹起的 。处呈现的峰为甲基、亚甲基的键的伸缩振动 为吡喃环的三个特征接收峰此中 伸缩振动和羟基的接收峰。在 。的接收图 的红外光谱图 的红外光谱见图 由图可知茶粕多糖 这是因为糖分子内或分子间氢键的伸缩振动惹起的 处呈现的峰为甲基、亚甲基的键的伸缩振动

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